附件：雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2015年第11號）.doc

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批所等行政事項，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、范圍

雌激素受體（Estrogen Receptor, ER）和孕激素受體（Progesterone Receptor, PR）是調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)及乳腺等器官細胞生長發(fā)育的重要分子，也是乳腺癌的重要生物標記物。ER和PR的表達情況與患者的內(nèi)分泌治療效果相關(guān)。目前，ER、PR檢測廣泛應(yīng)用于乳腺癌患者的預(yù)后判斷與指導(dǎo)用藥。ER有兩種亞型, 分別是ERα和ERβ，兩者結(jié)構(gòu)相似，但在組織分布及生物學(xué)功能上不盡相同。其中ERβ于1996年首次發(fā)現(xiàn)，遠晚于ERα，目前對于ERβ在組織中表達情況及調(diào)控作用尚不清晰。本指南所提及ER為ERα。

對ER和PR的準確檢測，是乳腺癌患者接受恰當治療的重要依據(jù)。我國相關(guān)乳腺癌診治指南已將ER、PR的免疫組織化學(xué)檢測列為乳腺癌患者的常規(guī)檢測項目，并用于指導(dǎo)患者的內(nèi)分泌治療。但目前ER、PR檢測在不同臨床檢測機構(gòu)之間、不同檢測試劑之間存在測定結(jié)果差異。檢測結(jié)果中存在一定比例的假陽性和假陰性結(jié)果。相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)必須充分意識到該類產(chǎn)品的潛在風(fēng)險，根據(jù)本指導(dǎo)原則的要求，對該類試劑的安全性和有效性進行科學(xué)合理的驗證。

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒是指利用免疫組織化學(xué)法，對病理組織切片中雌激素受體或孕激素受體進行檢測的試劑。此類試劑為特異性單克隆或多克隆抗體，或抗體與顯色系統(tǒng)、對照試劑、質(zhì)控片（如有）及其它輔助試劑一同包裝成試劑盒形式的檢測試劑，用于乳腺癌患者的預(yù)后判斷、指導(dǎo)用藥及對其它腫瘤的鑒別診斷。

本指導(dǎo)原則僅包括雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜（包括產(chǎn)品風(fēng)險分析資料等），應(yīng)當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

內(nèi)容應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求，并建議申請人著重介紹以下幾方面內(nèi)容：

1.生物學(xué)特性，包括受體的基本結(jié)構(gòu)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；

2.組織分布與功能；

3.與疾病和治療的關(guān)系；

4.國際和國內(nèi)同類產(chǎn)品異同介紹，包括第一抗體克隆的選擇、顯色系統(tǒng)選擇、試驗方法和樣本處理等。

（二）主要原材料研究資料

1.以文獻的形式闡述ER/PR檢測的臨床意義。

2.第一抗體的詳細研究資料。

2.1 詳細的抗體性質(zhì)鑒定資料，包括：抗體的特異性、親和常數(shù)及效價、抗體的類型及亞型、抗體蛋白純度的驗證。對于企業(yè)自制抗體，還應(yīng)提供抗體識別位點的驗證。申請人可通過放射性免疫分析法、雙向瓊脂擴散法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫印跡法、凝膠電泳等方法進行研究。

2.2 第一抗體的克隆選擇、制備、純化等詳細試驗資料,包括以下兩種情況：

2.2.1 企業(yè)自制抗體

2.2.1.1 詳述抗體克隆的選擇依據(jù)，可提交文獻資料或克隆選擇的試驗研究資料；

2.2.1.2 明確免疫源和抗原的性質(zhì)。

2.2.2 企業(yè)外購抗體

2.2.2.1 詳述抗體克隆的選擇依據(jù)，可提交文獻資料或克隆選擇的試驗研究資料（建議企業(yè)選擇已經(jīng)臨床充分驗證的克隆作為第一抗體）；

2.2.2.2 明確免疫源、抗原的性質(zhì)及外購方名稱；

2.2.2.3 提交外購方出具的抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標的要求和申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

3.酶標第二抗體系統(tǒng)（如適用）的選擇及驗證資料。

檢測試劑盒中的第二抗體系統(tǒng)一般均為外購，應(yīng)詳述酶標第二抗體系統(tǒng)的確定依據(jù)，明確外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對酶標第二抗體系統(tǒng)相關(guān)主要原材料的技術(shù)指標。

4.企業(yè)內(nèi)部質(zhì)控片及試劑盒配套質(zhì)控片（如適用）的研究資料。

詳述內(nèi)部質(zhì)控片的組成，包括組織類型、例數(shù)和強度。應(yīng)提供對內(nèi)部質(zhì)控片組織類型和強度的確定依據(jù)，建議采用臨床上普遍認為質(zhì)量較好的同類試劑進行確認。建議在試劑盒中設(shè)置弱陽性質(zhì)控品（如適用），以便更加靈敏的監(jiān)控試驗過程中可能出現(xiàn)的錯誤結(jié)果。

5.封閉液的研究資料。

封閉液應(yīng)能夠封閉非特異結(jié)合、內(nèi)源性酶活性或內(nèi)源性生物素等。

6.其他主要原輔料的選擇及驗證資料，如牛血清白蛋白、抗原修復(fù)液、抗菌劑等。

該類主要原輔料一般均為外購，應(yīng)說明有生物活性的原輔料的外購方名稱，提交外購方出具的檢驗證書，詳述申請人對每一原輔料的質(zhì)量要求。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.第一抗體制備的詳細研究資料（如適用）。

3.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

4.詳述抗原修復(fù)方法的確定依據(jù)。

5.最適抗體滴度和抗體孵育時間確定的研究。

6.檢測體系反應(yīng)條件確定的研究：申請人應(yīng)考慮脫蠟水化、酶阻斷、抗體孵育、顯色、復(fù)染等各個步驟對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。常規(guī)免疫組織化學(xué)檢測步驟的確定，可引用行業(yè)和企業(yè)內(nèi)部規(guī)范性操作手冊或文獻，但應(yīng)對確定后的檢測步驟進行性能驗證。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、質(zhì)控標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。對于本類產(chǎn)品建議著重對以下分析性能進行研究：

1.免疫反應(yīng)性

1.1 正常組織：對30種正常人體組織（見表1），每種組織類型不少于3例，進行特異性評價，同時對著色位置及染色特點進行描述。

表1：正常組織列表

1.2 非正常組織：對相關(guān)良性、惡性病變組織（見表2）進行特異性評價，每種組織類型不少于3例。如有采用申報產(chǎn)品為試驗材料進行研究的相關(guān)文獻資料，也可提交文獻資料驗證抗體試劑或檢測試劑盒與非正常組織的免疫反應(yīng)性。

表2：非正常組織列表

1.3 ER抗體試劑或ER檢測試劑應(yīng)對ERβ的交叉反應(yīng)進行評價。可利用ERα和ERβ的分子量差異，采用免疫印記法或利用免疫組織化學(xué)方法對ERβ高表達、ERα不表達的組織樣本進行免疫反應(yīng)性研究，驗證抗體的特異性。也可利用其它合理的方法進行交叉反應(yīng)研究。

1.4 可選擇經(jīng)充分驗證的組織芯片或經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片進行免疫反應(yīng)性研究。應(yīng)明確樣本組織類型的確定方法，應(yīng)提供商業(yè)化組織芯片相關(guān)信息。

2.精密度

2.1 檢測內(nèi)精密度：對連續(xù)切片的乳腺癌樣本，進行檢測重復(fù)性研究。包括染色強度、陽性細胞百分比及著色位置。

2.2 檢測間精密度：對可能影響檢測精密度的主要變量進行驗證，包括批次（不少于3批次）、適用機型、操作方法（手工/自動）、檢測時間和操作人員。

2.3 建議對不同染色強度、不同陽性細胞百分比及ER/PR陰性的乳腺癌樣本進行包含染色位置，染色強度和陽性細胞百分比數(shù)的精密度研究。

3.靈敏度

建議申請人對不少于5例ER/PR弱陽性樣本（1%-%—10%）進行靈敏度評價。

4.參加國內(nèi)外質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動情況

建議企業(yè)積極參加國內(nèi)（衛(wèi)生計生委病理質(zhì)控評價中心）、國際質(zhì)控機構(gòu)（NordiQC、UK NEQUAS、CAP等）的質(zhì)控活動，并提交質(zhì)控結(jié)果報告。

（五）陽性判斷值資料

提交最新的國際、國內(nèi)診療指南等相關(guān)文獻資料。提交染色特點的研究資料，包括陽性樣本著色顏色、染色部位、背景信息及不同強度陽性組織的染色特點。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者應(yīng)至少包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性（如適用）和稀釋穩(wěn)定性（如適用）研究。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。樣本穩(wěn)定性研究至少包括切片在不同儲存條件下的穩(wěn)定性研究。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

1.試驗方法

選擇已批準上市，臨床普遍認為質(zhì)量較好，如該抗體克隆經(jīng)過國際權(quán)威機構(gòu)（如NordiQC等）年度評分成績較好的同品種產(chǎn)品，作為對比試劑。采用試驗用體外診斷試劑與之進行比較研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

計算所有檢測乳腺癌樣本中ER或PR陽性比例，間接驗證ER及PR的檢測有效性。對于第一抗體選擇未經(jīng)充分臨床驗證克隆的PR檢測試劑，還應(yīng)對不少于200例乳腺癌樣本同時進行ER、PR檢測，分別計算陽性比例并對出現(xiàn)的ER(-)/PR(+)樣本，用其他合理的方法進行復(fù)核并分析原因。

對于預(yù)期用途中已明確配合具體治療藥物名稱的ER、PR檢測試劑，應(yīng)采用聯(lián)合藥物評價臨床試驗的形式，同時評價檢測結(jié)果與接受治療后臨床預(yù)后的相關(guān)性和試驗用體外診斷試劑與對比試劑檢測的一致性。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇

申請人應(yīng)選定不少于3家(含3家) 臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認可。盡量使各臨床試驗機構(gòu)的臨床樣本有一定的區(qū)域代表性。臨床試驗機構(gòu)應(yīng)具有嚴格的質(zhì)量管理體系，執(zhí)行實驗室內(nèi)部日常質(zhì)量控制，參加國家病理以及國際病理質(zhì)控機構(gòu)的質(zhì)控活動。

3.臨床試驗方案

3.1 各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

3.2 以圖表的形式對試驗總體設(shè)計及工作流程進行描述。圖表中應(yīng)包括連續(xù)切片的數(shù)量及用途分配等。

3.3 試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除選擇標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應(yīng)記錄在案，并明確說明原因。各臨床試驗機構(gòu)選用的對比試劑應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

3.4 試驗方案中應(yīng)明確閱片者、操作者的選擇標準。閱片者應(yīng)選擇在免疫組織化學(xué)和乳腺癌病理診斷中有豐富經(jīng)驗的病理科醫(yī)生。

3.5 在試驗操作過程中和判定檢測結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。臨床試驗研究方案中應(yīng)詳述盲法的具體操作流程。

3.6 臨床試驗前申請人應(yīng)對臨床試驗機構(gòu)參與人員進行相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)，并采用統(tǒng)一判讀標準等手段，保持各臨床試驗機構(gòu)的判讀一致性。

3.7 在整個試驗中，試驗用體外診斷試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。臨床試驗研究方案中應(yīng)明確內(nèi)部質(zhì)控的方法及配合用陰性質(zhì)控試劑的詳細信息。

4.病例選擇及樣本類型

臨床試驗應(yīng)選擇經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋乳腺癌組織樣本或乳腺癌組織芯片。樣本例數(shù)不低于1000例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于300例，其中陽性樣本應(yīng)包含不同陽性細胞百分比，弱陽性樣本不少于10例。如適用冰凍樣本，也需在不少于2家臨床試驗機構(gòu)進行臨床試驗，且至少滿足冰凍樣本總例數(shù)不少于200例，陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于60例，弱陽性樣本不少于5例。

如試劑可用于鑒別診斷，臨床試驗還應(yīng)選擇乳腺癌、消化道腫瘤、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等組織樣本。總樣本例數(shù)不少于500例，其中陽性樣本例數(shù)不應(yīng)少于150例。

若抗體試劑適用于不同檢測體系，如配合使用的第二抗體、顯色劑等，則不同檢測體系（包括不同組合）均需在一種檢測體系滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，增加的另外檢測體系應(yīng)在不少于2家臨床試驗機構(gòu)完成至少200例臨床樣本的試驗，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。

如抗體試劑包含濃縮型與即用型兩種劑型，在一種劑型滿足臨床試驗最低例數(shù)要求的前提下，另一種劑型，應(yīng)在不少于2家臨床試驗機構(gòu)完成至少200例臨床樣本的試驗，且選擇的臨床樣本應(yīng)包含一定比例的陽性樣本。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，對于本類檢測試劑比較研究試驗的一致性研究，常選擇配對2×2表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測結(jié)果，計算陽性符合率、陰性符合率和總符合率，選擇合適的統(tǒng)計學(xué)方法計算95%置信區(qū)間，同時對定性結(jié)果進行χ2檢驗或kappa檢驗，以檢驗兩種檢測試劑檢測結(jié)果的一致性。

鑒于檢測結(jié)果的準確性對患者的診治影響巨大，假陰性結(jié)果將直接導(dǎo)致患者失去接受相關(guān)激素藥物治療的機會，而假陽性結(jié)果則使得患者接受不必要的治療，在造成巨大的醫(yī)療資源浪費的同時，患者還需承受藥物帶來的嚴重不良反應(yīng)。因此建議與比對試劑的陽性符合率和陰性符合率應(yīng)分別不低于90%和95%。

用試驗用體外診斷試劑及對比試劑陽性細胞百分比做散點圖的方法，配合適當?shù)慕y(tǒng)計分析方法，如Pearson相關(guān)分析等，計算相關(guān)系數(shù)，評價試驗用體外診斷試劑與對比試劑在陽性細胞百分比上的檢測一致性。

對于本類檢測試劑與對比試劑染色強度的一致性研究，結(jié)果應(yīng)采用R×C列聯(lián)表的形式給出，并計算不同染色強度的符合率及總符合率，給出總符合率的95%可信區(qū)間，采用Kappa檢驗以檢驗兩種檢測試劑染色強度的一致性，并給出Kappa統(tǒng)計量值及P值。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對兩種試劑檢測結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用其他合理的方法進行復(fù)核，同時對切片的染色特點及差異產(chǎn)生原因進行分析。

7.質(zhì)量控制

由于免疫組化實驗前處理步驟較多，導(dǎo)致判讀結(jié)果可能會在實驗人員間、實驗室間產(chǎn)生差異。為了客觀單一評價試劑性能，盡量減少這種人為差異對最終結(jié)果造成的影響，臨床試驗開始前，各臨床試驗機構(gòu)應(yīng)進行判讀一致性試驗及統(tǒng)一的質(zhì)量控制，統(tǒng)一操作步驟，確保同樣的染色片在不同醫(yī)院的判讀結(jié)果保持一致。該預(yù)評估內(nèi)容、實現(xiàn)方法、結(jié)果等應(yīng)在臨床試驗報告中體現(xiàn)。

8.原始數(shù)據(jù)

8.1 提交病例報告表（Case Report Form, CRF），內(nèi)容應(yīng)至少包括：性別、年齡、病理診斷結(jié)果、試驗用體外診斷試劑檢測陽性細胞百分比和染色強度、對比試劑檢測陽性細胞百分比和染色強度。陽性細胞百分比可取整到每10%為一個等級，<10%的應(yīng)盡量細化。

8.2 提交入選樣本染色代表性彩色圖片，并對染色特點包括組織形態(tài)、染色強度和背景染色特點進行簡要評述。

9.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗報告應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床試驗總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述：

9.1 臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

9.1.1 臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要試驗人員的選擇、人員簡介等基本情況介紹；

9.1.2 病例納入/排除標準、標本的選擇例數(shù)及標準；

9.1.3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

9.1.4 陰、陽性判讀標準、統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

9.2 臨床試驗具體情況

9.2.1 試驗用體外診斷試劑和對比試劑的名稱、批號、有效期等信息；

9.2.2 對各臨床試驗機構(gòu)的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

9.2.3 質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、質(zhì)控品檢測情況，對檢測結(jié)果判讀的抽查結(jié)果評估；

9.2.4 具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的驗證等。

9.3 臨床試驗結(jié)果及分析

9.3.1 數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測或采用其他合理的方法進行復(fù)核及無法評估樣本的描述處理、試驗過程中是否涉及對方案的修改。

9.3.2 結(jié)果的一致性分析

計算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。采用適當?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，對定性檢測試劑進行一致性評價，對半定量檢測試劑進行線性相關(guān)性分析。

9.4 討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床試驗的特別說明（如有），最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》的相關(guān)規(guī)定，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）要求編寫。

雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標：外觀、符合性、批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、穩(wěn)定性等。如擬申報試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標準，則產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于上述標準要求。另外，產(chǎn)品技術(shù)要求中應(yīng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。

（九）注冊檢驗

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類產(chǎn)品應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理總局認可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行連續(xù)3個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。對于已經(jīng)有國家參考品的項目，在注冊檢驗時應(yīng)采用相應(yīng)的國家參考品進行檢驗；對于目前尚無國家參考品的項目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)自行建立穩(wěn)定的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（十）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢測方法及檢測結(jié)果解釋等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，明確雌激素受體、孕激素受體抗體試劑及檢測試劑盒（免疫組織化學(xué)法）說明書的重點內(nèi)容，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1．【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1 試劑盒用于體外半定量和/或定性檢測經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋和/或冰凍組織切片中雌激素受體/孕激素受體。用于乳腺癌的預(yù)后判斷與指導(dǎo)用藥及對其它腫瘤的鑒別診斷。（注：與乳腺癌預(yù)后判斷及指導(dǎo)用藥相關(guān)的ER/PR檢測試劑，建議采用陽性細胞百分比數(shù)和染色強度的半定量形式出具報告。）

1.2 ER/PR陽性表達于細胞核內(nèi)。

1.3 介紹特異性結(jié)合位點。

1.4 簡單介紹ER/PR的生物學(xué)特征，如基本結(jié)構(gòu)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。

1.5 簡單介紹ER/PR在乳腺癌預(yù)后判斷、用藥指導(dǎo)和鑒別診斷中的作用。

1.6 如未進行與藥物聯(lián)合評價臨床試驗，則不應(yīng)涉及具體藥物產(chǎn)品（商品）名稱、生產(chǎn)企業(yè)信息等，并注明該產(chǎn)品未與具體藥物聯(lián)合進行臨床評價。

1.7 明確說明對任何陽性或陰性結(jié)果的解讀，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。

2.【檢測原理】

簡述免疫組織化學(xué)的基本原理，并對申報試劑的抗原修復(fù)方法、第一抗體、放大系統(tǒng)、顯色系統(tǒng)及結(jié)果觀察等進行簡要介紹。

3.【主要組成成分】

3.1 說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息；質(zhì)控片（如有）的組織名稱。

3.2 對檢測中使用的抗體信息進行簡單介紹，包括抗體的克隆性質(zhì)（單克隆或多克?。?、抗體的類型（如IgG1)、抗體的種屬性、克隆號、抗體制備形式（如細胞培養(yǎng)上清液）、免疫源。

3.3 試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號及其他相關(guān)信息。

4.【儲存條件及有效期】

對試劑的儲存條件、有效期、開封穩(wěn)定性、機載穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性和凍融次數(shù)限制等信息做詳細介紹。

5.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

5.1 應(yīng)明確對適用樣本的取材、固定、包埋的具體要求。此部分內(nèi)容可參考《美國臨床腫瘤學(xué)會和美國病理學(xué)家學(xué)會乳腺癌雌激素/ 孕激素受體免疫組化檢測指南》或國內(nèi)相關(guān)標準操作性文件內(nèi)容進行編寫或引用。

5.2 明確樣本的穩(wěn)定性。

6.【檢測方法】

詳細說明操作的各個步驟：

6.1 明確檢測需要的儀器、設(shè)備。如預(yù)處理儀、染色儀等。注明貨號及生產(chǎn)商。

6.2 試劑配制方法、注意事項，試劑開封、配制后使用方法及注意事項等。

6.3 手工操作應(yīng)詳述脫蠟和水化、組織抗原修復(fù)、第一抗體孵育、顯色等各操作步驟。描述應(yīng)盡量細化，需明確各步驟處理時間及pH值等內(nèi)容。如第一抗體為濃縮型抗體，還需明確抗體工作液的濃度及稀釋液的詳細信息。

6.4 質(zhì)量控制：明確每一批次檢測樣本均應(yīng)同時進行內(nèi)、外陽性/陰性質(zhì)控染色及空白對照對比。質(zhì)控應(yīng)包含從強陽性到陰性不同ER/PR濃度水平的細胞系細胞或不同ER/PR表達水平（染色強度）的乳腺癌組織切片，其中應(yīng)包括至少一個中等陽性強度質(zhì)控或弱陽性乳腺癌組織切片。為用戶提供可作為陽性和陰性，內(nèi)、外對照的組織名稱。詳述質(zhì)控片制備的要求及質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗有效性的判斷），以及質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

7.【陽性判斷值】（如適用）

根據(jù)相關(guān)指南及規(guī)范性文件，以陽性百分比的形式明確判讀參考值。

8.【檢驗結(jié)果的解釋】

配合彩色圖片對結(jié)果判讀進行說明，彩色圖片應(yīng)至少包含不同級別陽性及陰性質(zhì)控片（如適用）的結(jié)果圖例。

明確陽性為細胞核著色，其它部位著色為非特異染色。明確顯色劑名稱及顯示顏色。

對可能出現(xiàn)的假陰性、假陽性情況進行說明，并明確提出出現(xiàn)該情況后的處理方法。

9.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

9.1 免疫組織化學(xué)檢測是一種需通過多個檢測步驟完成的診斷過程。在試劑的選擇、取材、固定、處理、切片的制備和染色結(jié)果的解釋上需要進行專門的培訓(xùn)。

9.2 任何陽性或陰性結(jié)果的解讀，應(yīng)由病理科醫(yī)生結(jié)合病理形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)及其它檢測方法進行，不作為單獨的診斷指標。

9.3 復(fù)染過度或不足都可能影響結(jié)果的判讀。

9.4 不恰當?shù)娜旧敖M織的處理過程直接影響染色效果，造成假陽性、抗體定位不準確或假陰性結(jié)果。結(jié)果不一致可能是由樣本固定和包埋方法不同或組織樣本內(nèi)固有差異造成的。

9.5 陰性結(jié)果表示未檢出抗原，不一定表示樣本中無該抗原存在。待測抗原編碼基因變異、抗原低表達或抗原修復(fù)不當?shù)龋紩斐煽乖瓱o法檢出。

9.6 本試劑僅對經(jīng)10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進行了驗證（如適用），不得用于其它樣本類型或流式細胞檢測等其它用途。

10.【產(chǎn)品性能指標】

詳述以下性能指標：

10.1 免疫反應(yīng)性：詳述正常組織，相關(guān)良、惡性病變組織中的免疫反應(yīng)性。包括染色位置及染色特點。

10.2 精密度：詳述檢測內(nèi)精密度及不同適用機型（如適用）、檢測時間、檢測人員及批次的檢測間精密度。

10.3 臨床試驗數(shù)據(jù)總結(jié)。

11.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

11.1 有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組份（如有）生物安全性的警告。

11.2 有關(guān)實驗操作中涉及試劑的安全性提示，包括對有毒有害物質(zhì)的防護及危險物品的處理方法等。